Menu
X

Giải trình tự thế hệ mới bằng phương pháp tổng hợp (ILLUMINA)

Cập nhật: 03-07-2018 09:24
Lượt xem: 30

Về cơ bản, nguyên lý của giải trình tự thế hệ mới bằng phướng pháp tổng hợp tương tư như giải trình tự DNA theo phương pháp Sanger, trong đó DNA polymerase tổng hợp chuỗi DNA hình thành bằng cách sử dụng dNTP gắn vào đầu 3’ của chuỗi DNA đang tổng hợp ...

1. Nguyên lý cơ bản

Về cơ bản, nguyên lý của giải trình tự thế hệ mới bằng phướng pháp tổng hợp tương tư như giải trình tự DNA theo phương pháp Sanger, trong đó DNA polymerase tổng hợp chuỗi DNA hình thành bằng cách sử dụng dNTP gắn vào đầu 3’ của chuỗi DNA đang tổng hợp theo nguyên tắc bổ sung. Tuy nhiên, đối với giải trình tự thế hệ mới, thay vì giải trình tự một đoạn đơn lẻ, kỹ thuật này cho phép giải trình tự với một lượng lớn các đoạn DNA khác nhau song song tại cùng một thời điểm, từ đó tiết kiểm thời gian và cho lượng dữ liệu đầu ra vô cùng lớn so với phương pháp Sanger cũ.

2. Quy trình chung

-Tạo thư viện: DNA cần giải trình tự được tách chiết và cắt thành các mảnh nhỏ (nếu cần) và gắn các adapter cần thiết cho quá trình giải trình tự

- Tạo cluster: mỗi sợi DNA được giữ lại trên bề mặt thiết bị giải trình tự (flowcell) bằng adapter đã được gắn trước đó. Mỗi sợi DNA sau khi được khuếch đại sẽ tạo thành một cụm DNA (cluster) có trình tự giống hệt nhau để sử dụng cho quá trình giải trình tự.

- Giải trình tự: dNTP có gắn các tín hiệu huỳnh quang tương ứng với 4 loại nucleotide, Tín hiệu huỳnh quang của từng nulceotide được ghi lại trong quá trình tổng hợp theo nguyên tắc bổ sung trên sợi DNA khuôn.

- Phân tích kết quả: Kết quả từ quá trình giải trình tự được phân tích tùy theo mục đích sử dụng.

giai trình tự thế hệ mới

Quá trình sợi DNA được gắn vào bề mặt flowcel bằng adapter đặc hiệu (hình bên trái), cluster được hình thành (ở giữa) và quá trình giải trình tự (bên phải)

3. Đào tạo về kỹ thuật giải trình tự thế hệ mới sử dụng phương pháp tổng hợp

- Nguyên lý của kỹ thuật:

+ Nguyên lý của quá trình tạo thư viện

+ Nguyên lý của quá trình tạo cluster và giải trình tự

+ Nguyên lý của quá trình phân tích kết quả (các loại dữ liệu tin sinh, các thuật toán sử dụng)

+ Kiểm soát chất lượng và các thông số kiểm soát chất lượng của quá trình giải trình tự thế hệ mới bằng phướng pháp tổng hợp.

- Quy trình thực hiện 

- Ứng dụng của kỹ thuật giải trình tự thế hệ mới trong xét nghiệm và phân tích di truyền 

Khách hàng và đối tác

Copyright © GENTIS JSC - 2010 - All rights reserved. DMCA.com Protection Status